Fundamentos de Engenharia Genética

A engenharia genética permite manipular directamente os genes de determinados organismos com objectivos práticos.  

São várias as aplicações da Engenharia Genética e as técnicas utilizadas.

O objectivo da engenharia genética consiste em isolar e transferir genes, responsáveis pela produção de certas substâncias (por exemplo, as proteínas), para outros seres vivos que não produziam estas substâncias, de modo a serem funcionais nestes seres.

Técnicas:

-DNA Recombinante

-DNA Complementar

-PCR

-Bibliotecas de genes ou genómicas

DNA Recombinante

1- Aplicam-se as enzimas de restrição no DNA do vector (vectores: Plasmídeo; Bacteriófagos, ou Fagos) e no DNA de origem (que contém o gene de interesse)

2- Coloca-se o vector e o gene em contacto, usam-se ligases do DNA para promover a ligação

3- Promover a incorporação do  vector por parte das bactérias (crescimento num meio de cultura seleccionado)

4- Seleccionar as bactérias que incorporaram o vector - crescimento em meio de cultura com pressão selectiva, ex: antibióticos

5- Purificação - separação do composto de interesse de outros produzidos pelo metabolismo normal do hospedeiro.

DNA Complementar

Utiliza-se em conjunto com a técnica do DNA Recombinante.  Permite obter DNA maduro, já sem intrões. Para a técnica de DNA complementar são necessários:

-Molécula de mRNA;

-Transcriptase reversa  (enzima que catalisa a formação da cadeia complementar do DNA- transcriptase porque é um processo de transcrição, reversa porque é inverso ao processo de transcrição da molécula de DNA em mRNA);

-DNA polimerase- que catalisa a formação da cadeia complementar de DNA;

-Nucleótidos livres.

PCR- Reacção de Polimerização em Cadeia

O PCR é um método que permite, de forma rápida, amplificar uma determinada porção de DNA.

Bibliotecas de Genes ou Genómicas

O processo de multiplicação dos organismos que contêm rDNA permite não só a produção da substância codificada pelo gene inserido, como também a clonagem desse gene. Os investigadores conservam, assim, cópias desses genes, constituindo bibliotecas de genes, ou bibliotecas genómicas. Esses genes armazenados ficam assim disponíveis para posteriores utilizações.